Chromatografia cienkowarstwowa to metoda analizy chemicznej polegająca na wykorzystaniu warstwy sorbentu o grubości 0,1-0,5 mm jako fazy stacjonarnej. Metoda TLC znajduje zastosowanie w różnych dziedzinach i pozwala na oznaczenie szerokiej gamy związków chemicznych.
Zasada metody
Metoda chromatografii cienkowarstwowej narodziła się z chromatografii papierowej, a pierwsze eksperymenty przeprowadzono w latach 80. XIX wieku. Aktywne wykorzystanie tej analizy rozpoczęło się dopiero po 1938 roku.
Technika TLC obejmuje fazę ruchomą (eluent), fazę stacjonarną (sorbent) i analit. Faza stacjonarna jest nakładana i mocowana na specjalnej płycie. Płytka może być wykonana ze szkła, aluminium lub tworzywa sztucznego – są to podłoża wielokrotnego użytku, które po każdym użyciu należy dokładnie umyć, wysuszyć i przygotować do aplikacji sorbentu. Możliwe jest również użycie papierowych talerzy, które wyrzuca się po użyciu.
Jako fazę stacjonarną najczęściej stosuje się żel krzemionkowy, ale możliwe jest zastosowanie innych sorbentów, np. tlenku glinu. Przy stosowaniu tego lub innego sorbentu należy ściśle przestrzegać technologii, aby wynik był dokładny, na przykład, ponieważ żel krzemionkowy może dać nieprawidłowy wynik, jeśli powietrze w laboratorium jest zbyt wilgotne.
Jako fazę ruchomą stosowane są rozpuszczalniki, np. woda, kwas octowy, etanol, aceton, benzen. Wybór rozpuszczalnika musi być podejmowany odpowiedzialnie, ponieważ wynik chromatografii bezpośrednio zależy od jego właściwości (lepkość, gęstość, czystość). Dla każdej analizowanej próbki wybierany jest indywidualny rozpuszczalnik.
Analiza
Próbkę należy rozcieńczyć w rozpuszczalniku. Jeśli nie nastąpi całkowite rozpuszczenie i pozostanie zbyt wiele zanieczyszczeń, próbkę można oczyścić przez ekstrakcję.
Nanoszenie próbki na płytkę może odbywać się automatycznie lub ręcznie. Aplikacja automatyczna wykorzystuje metodę mikrorozpylania, w której każda próbka jest natryskiwana na odpowiedni obszar podłoża. Do aplikacji ręcznej używa się mikropipety. Dla każdej próbki na płytce umieszcza się ślady ołówka. Każdą próbkę nakłada się kapilarą na płytkę w jednej linii w dostatecznej odległości od oznaczeń, aby nie reagowała z węglem z ołowiu.
Płytkę umieszcza się w naczyniu, na dno którego wlewa się eluent. Wspornik umieszcza się jedną krawędzią w naczyniu do zaznaczonej linii. Naczynie jest szczelnie zamknięte, aby uniknąć wyparowania fazy ruchomej. Pod działaniem sił kapilarnych eluent zaczyna unosić się w górę warstwy sorbentu. Gdy eluent osiągnie określony poziom, płytkę wyjmuje się z naczynia i suszy.
Jeśli pożądana substancja nie ma koloru, nie będzie widoczna na podłożu. W związku z tym wykonywana jest wizualizacja - obróbka płytki za pomocą pary jodu lub innych barwników.
Po takim przetworzeniu wynik jest oceniany. Na sorbencie pojawiają się kolorowe obszary o różnym natężeniu. Aby określić substancję (lub grupę substancji), kolorowe obszary, ich wielkość, intensywność i ruchliwość porównuje się z próbką referencyjną.
Metoda TLC jest szeroko stosowana, ponieważ jest szybka, tania, dokładna, intuicyjna, nie wymaga skomplikowanego sprzętu i jest łatwa do interpretacji.
